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液相色譜儀的使用方法的具體步驟

 
         1.色譜柱它包括空柱和填料。空柱是內(nèi)壁拋光的不銹鋼管,內(nèi)徑為4~5mm,長100~250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈,用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中,用柱式機(jī)械往復(fù)泵輸入新鮮脫氣的流動相。等基線平直后可用苯、萘、菲的混合試液,用正己烷(含 0.05%甲醇)或甲醇:水(83:17)為流動相測定柱效及分離度塔板數(shù)在2~3萬/ml以上及分離度在1.5以上者,柱效好。
         2.流動相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動相放于貯液瓶中,經(jīng)過有濾過頭、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱,*后自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法(isocratic dlution),即自洗脫開始到結(jié)束,溶劑的配比恒定。另一類為梯度洗脫法(gradicnt clution),即使溶劑的極性強(qiáng)度在色譜過程中逐漸增加。
         3.檢測器適用于血藥濃度的檢測器有紫外線吸收,熒光發(fā)射和電化學(xué)三種。紫外檢測器應(yīng)用于對紫外光有吸收的**,大多數(shù)**分子對紫外光有吸收,故能較普遍采用,檢測限有0.1μg左右。紫外檢測器有固定波長型、可變波長型及掃描器,既能使流動相停流作組分的定性定量檢測,又能提高測定靈敏度,重現(xiàn)性較好。熒光發(fā)射檢測器對能產(chǎn)生熒光的**才能使用。
         4.數(shù)據(jù)處理現(xiàn)代高效液相色譜儀帶有數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),除記錄譜外,還能自動記錄峰的保留時(shí)間,能自動積分求算峰面積,并能按照預(yù)定的程序作有關(guān)計(jì)算,報(bào)告分析結(jié)果。

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